抗生素药物敏感性试验简称药敏试验（或耐药试验），旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感性（或耐受程度），以指导临床合理选用抗菌药物的微生物学试验。药敏试验目的是使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。

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    纸片扩散法

    1、制备接种菌悬液

    a)被测菌株和标准菌株接种于非选择性培养基如血平皿，置于35℃空气培养18h~24h。

    b)采用直接菌落法或肉汤增菌法制备:

    1)直接菌落法:选取孵育18h~24h后的菌落形态一致的且生长较好的3~5个菌落:采用1)接种环或无菌拭子触碰每个菌落顶部，转移至含有4mL~5mL,的胰大豆肉汤或无菌生理盐水中。

    2)肉汤增菌法:将单个菌落接种至肉汤培养基，置于35℃±2℃孵育，至浊度接近规定的浓度(通常孵育2h~6h)。

    3)采用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊管，也可用电子比浊仪。

    2、接种平皿

    a)用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去。

    b)在MHA平皿表面均匀涂布3次，每次旋转平皿60°，最后沿平皿内琼脂边缘涂抹一周。c)校正浓度后的菌液在15min内接种完毕。

    3、贴抗菌药物纸片

    a)接种菌悬液后的MHA平皿置室温下干燥3min~5min。

    b)用纸片分配器或无菌镊子将抗菌药物纸片紧密贴于平皿。各纸片中心相距≥24m。纸片贴上后不应再移动。

    4、 孵育

    贴上纸片15 min内，须把平皿倒置放于35 ℃孵箱中孵育16h~18h。对于某些特殊抗菌药物如苯唑西林或万古霉素，孵育时间需延长至24h。

    5、结果判读

    a)将平皿置于黑色背景下,利用反射光从平皿背面用游标卡尺或直尺测量无明显细菌生长区域的直径(含纸片)，即抑菌圈直径，取整数位，单位为mm。

    b)培养基若加入血液，须打开平皿盖，借助反射光，从正面测量抑菌圈直径。

    c)测量万古霉素、利奈唑胺和苯唑西林等的抑菌圈时，使用透射光。

    d)测量甲氧苄啶和磺胺类药物的抑菌圈时，可忽视轻微生长(20%或较少菌苔生长)而测量较明显抑制的边缘。

    梯度扩散法

    梯度扩散法是一种结合稀释法和纸片扩散法原理对抗菌药物敏感性直接定量的药敏试验方法。操作步骤如下：

    1、待测细菌的菌悬液配制和接种方法同纸片扩散法。

    2、待平皿干燥后，用镊子将梯度扩散法条有MIC刻度面朝上，贴在已接种被测菌株的平皿表面,梯度扩散法条全长与琼脂表面紧密接触，试条贴好后不应移动。

    3、置于35 ℃±2 ℃孵箱中孵育 16 h~18 h。

    4、结果判读

    读取椭圆形抑菌圈与梯度扩散法条交界点的读值，即为待测抗菌药物的MIC值。

    自动化仪器法

    0.5麦氏浊度单位菌悬液的配制方法同纸片扩散法，按照各仪器说明书对菌液进行稀释。不同种属细菌稀释后的菌悬液，加入对应的商品化试验板条，上机进行检测。