医疗器械细菌回复突变试验

医疗器械细菌回复突变试验是检测受试物对于微生物（细菌）的基因突变作用，预测其潜在的遗传毒性，能够快速筛查出导致DNA碱基对替代、增加或缺失的遗传毒性物质，通常优先进行细菌回复突变试验来评价样品的潜在的致突变性/遗传毒性。
医疗器械细菌回复突变试验利用鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型菌株来检测点突变。这类菌株本身不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅有少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型菌株会回复突变成野生型，故在缺乏组氨酸的培养基上能生长形成菌落。故可以根据菌落形成的数量判断受试样品中是否存在致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需要同时在存在和没有代谢活化协同的条件下进行试验。
中科检测动物毒理试验中心，提供毒理检测，可以开展医疗器械细菌回复突变试验，报告具有CMA和CNAS资质，欢迎咨询。

鼠伤寒沙门氏菌TA1535、鼠伤寒沙门氏菌TA97a或TA97或TA1537、鼠伤寒沙门氏菌TA98、鼠伤寒沙门氏菌TA100、鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2uvrA或大肠杆菌WP2uvrA(PKM101)。

a、预实验：对未知或怀疑对试验菌株有抑制作用的试验样品，应进行预实验。在有或无代谢活化的情况下，用回复突变的菌落数来评估样品是否有细胞毒性，如有抑制作用，则需对试验样品浸提液进行梯度稀释，所选的剂量范围应包括细胞毒性从最大到小或无细胞毒性，一般至少包括5个试验浓度梯度，并以最小或者无细胞毒性的浓度按照平板渗入法进行主试验。
b、主试验（平板渗入法）：使用移液器将冷冻保存的菌株培养物接种于5mL营养肉汤培养基无菌试管内，在37℃恒温培养箱中培养10-12h至对数增长期，其浓度不少于1×109CFU/ml，培养瓶可用黑纸包裹，以防光线照射细菌。
c、融化顶层培养基，将融化好的顶层培养基分装于无菌小试管，每管2mL，将试管放入45℃恒温水浴锅中保温。

在保温的顶层培养基中依次加入每种菌株的新鲜菌液0.1mL混匀，试验样品组加入浸提液0.1mL，阴性对照组加入0.1mL浸提介质，阳性对照组加入0.1mL诱变剂，活化组加入0.5mL10% S9混合液，未活化组加入0.5mL 0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，每个组做3个平行，轻轻混匀后迅速将此混合物倒入已经固化的底层培养基平皿中，转动平皿，使顶层培养基均匀分布，平放固化。全部平皿倒置于37℃培养箱培养48~72h。

培养结束后计数并记录每个平皿的菌落数，并计算3个平皿的平均数和标准差。

YY/T 0870.1-2013 医疗器械遗传毒性试验 第1部分：细菌回复突变试验