真菌杀灭试验目的是在实验室内测定消毒剂杀灭悬液中或载体上真菌繁殖体或真菌孢子所需剂量，以验证对真菌及其孢子实用消毒剂量。这种试验对于评估消毒剂的杀菌效果至关重要，特别是在选择能够对抗真菌的消毒产品时。真菌由于其能够形成孢子并在不利条件下形成厚膜孢子或双层细胞壁，对物理和化学因素具有强大的抵抗力，因此难以被杀。

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    真菌杀灭试验试验器材

    (1) 麦芽浸膏琼脂（MEA）

    (2) 沙堡琼脂培养基

    (3) 试验菌及其菌悬液或菌片的制备

    白色念珠菌 ATCC 10231 和黑曲霉菌 ATCC 16404 或孢子悬液与菌片按规定方法制备。 此外，根据消毒剂特定用途和特殊需要，可选用其它真菌或孢子悬液与菌片。

    （4）中和剂。

    （5）磷酸盐缓冲液( PBS， 0.03 mol/L，pH7.2)。

    （6）消毒剂稀释用硬水：见附录 A。

    （7）有机干扰物质：见附录 A。

    （8）刻度吸管 (0.1ml、1.0ml、5.0ml)。

    （9）恒温水浴箱。

    （10）喷雾装置（用于喷雾消毒试验）。

    （11）电动混合器。

    （12）计时装置。

    真菌杀灭试验分组

    试验分为下列各组:

    (1) 试验组，按 2.1.1.7.3 规定，选定消毒剂浓度与作用时间，对受试菌种的杀灭能力进行测定。

    (2) 阳性对照组，以硬水代替消毒剂溶液，按 2.1.1.7.3 规定程序进行试验。所得结果代表试验体系中所含试验菌的初始浓度，并以其计算消毒因子对试验菌的杀灭对数值。

    (3) 阴性对照组，观察同次试验用相关溶液和培养基有无污染。

    真菌杀灭试验程序

    常用杀灭试验有：悬液定量杀菌试验、载体浸泡定量杀菌试验、载体喷雾定量杀菌试验等。培养基对白色念珠菌为沙堡葡萄糖琼脂，对黑曲霉菌为麦芽浸膏琼脂（MEA）。活菌培养计数时，对白色念珠菌，在 37℃培养箱中培养 48h 观察最终结果。对黑曲霉菌，在 30℃培养箱中培养 72h 观察最终结果。

    真菌杀灭试验评价规定

    (1) 产品监督检验，按产品使用说明书指定的使用浓度和作用时间，重复试验 3 次 ，对白色念珠菌和黑曲霉菌各次试验的杀灭对数值均≥4.00，要求载体定量杀灭试验，各次试验的杀灭对数值均≥3.00，可判定该产品对真菌污染物消毒合格。

    (2) 产品申报卫生许可检验，按产品使用说明书指定的使用浓度和 3 个作用时间，重复试验 3 次，要求悬液定量杀灭试验在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间，以及最短作用时间的 1.5 倍时，各次试验的杀灭对数值均应≥4.00，在产品使用说明书规定使用浓度与最低作用时间的 0.5 倍时，允许杀灭对数值＜4.00，可判为实验室试验该产品对真菌污染物消毒的有效剂量。

    用载体浸泡定量杀灭试验评价杀菌效果时，在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间，以及最短作用时间的 1.5 倍时，各次试验的杀灭对数值≥3.00，在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间的 0.5 倍时，允许杀灭对数值＜3.00，可判为实验室试验该产品对真菌污染物消毒的有效剂量。